賽默飛經(jīng)典型HPLC分析柱表示化學(xué)試劑的純度,是可在高效液相色譜中使用的試劑的純度,制備色譜法、平行分析或梯度分析需要使用到不同的HPLC級試劑。對于HPLC流動相的處理和使用注意事項(xiàng)討論主要圍繞在流動相的制備和使用中應(yīng)采取的措施。對于樣品過濾的重要性討論主要圍繞在進(jìn)樣時清潔樣品的好處。
當(dāng)采用色譜分析進(jìn)行方法建立時,專屬性是必然需要考慮的問題之一,相關(guān)的指導(dǎo)原則明確要求提供專屬性圖譜,并對成分進(jìn)行標(biāo)注。在有關(guān)物質(zhì)方法開發(fā)時,毫無疑問,所有的雜質(zhì)均需要進(jìn)行相互有效分離;盡管有時無法達(dá)到基線分離,但至少達(dá)到分離度1.0~1.2,或者設(shè)置峰谷比的限制,以滿足定量檢測要求。而以各種主客觀理由陳述雜質(zhì)無法分離,采用兩個雜質(zhì)(無法分離,重合為一個色譜峰)合并計算的方式,已有被CDE發(fā)補(bǔ)案例。因此,對于專屬性,色譜分離是無法回避的要求。
HPLC級溶劑的純度通常超過99.9%,并且瓶身標(biāo)簽上還會標(biāo)明其他雜質(zhì)的含量。但是雜質(zhì)會導(dǎo)致多余的峰,從而干擾色譜圖中的主峰,對我們的分析結(jié)果產(chǎn)生干擾。雜質(zhì)產(chǎn)生的原因有很多,可能溶劑純度不夠,可能是瓶身不干凈或者軟管不干凈,還可能是溶劑吸濾頭的過濾雜質(zhì)效果不好。恒譜生不銹鋼流動相進(jìn)樣口過濾器能安全有效地保護(hù)泵和止回閥,尺寸小,適用于各種品牌的HPLC系統(tǒng)和多種小瓶口的存儲池容器。吸濾阻力較小,幾乎沒有背壓和形成空化,兼容多種流動相管路,無需換吸濾頭即可配不同規(guī)格的吸管,過濾微粒污染物效果好,無氣泡,溶劑利用率高。
樣品在注入液相系統(tǒng)前,必須選擇一種合適的HPLC溶劑。在反相高效液相色譜中,當(dāng)樣品溶劑與流動相的洗脫強(qiáng)度有差異,尤其是前者的洗脫強(qiáng)度較強(qiáng)時,就會產(chǎn)生峰的變形及柱效的降低。解決該問題有效的方法是使用流動相作為溶劑溶解樣品,這樣既可以避免樣品溶劑和流動相之間任何強(qiáng)度或粘度的不匹配,也可以減少樣品分析時基線的漂移。溶劑在流動相中起著重要的作用,并有助于將進(jìn)樣品通過分離柱后輸送到檢測器。為了滿足不同的分析要求,可以購買不同純度等級的溶劑來使用,HPLC分析需要使用Z高純度的溶劑,但是同時也要考慮成本和實(shí)用性等方面。